فایلیا | دانلود فایل | دانلود تحقیق و مقاله

وقوع بیماری باکتریائی لکه برگی و بلایت چغندر ناشی از

aptata . Pseudomonas syringae pv در ایران

چکیده

در بهار و تابستان ۸۱- ۱۳۸۰ نشانه هائی از یک بیماری جدید روی چغندر (Beta vulgaris) در حومه بابل مشاهده گردید.علائم بیماری روی برگ ها به صورت لکه های نکروزه قهوه ای تیره، و اغلب با هاله زرد رنگ در حاشیه

منبع کربن استفاده کنند. بیماریزائی سه جدایه با تزریق و محلول پاشی سوسپانسیون سلول ها روی بوته های ۶-۵ برگی چغندر در گلخانه به اثبات رسید. جدایه ها aptata . Pseudomonas syringae pv شناسائی شدند. نقوش الکتروفورزی پروتئین های سلولی جدایه ها شباهت زیادی به نقوش استرین پاتوتیپ aptata . P. syringae pv

مقدمه

بیماری های لکه برگی و بلایت باکتریائی در چغندر (Beta vulgaris) به وسیله چند گونه و پاتوار از باکتری های گیاهی از جمله :

(keyworth et al.) Collins & Jones 1983 Curtobacterium flaccumfaciens pv.betae pseudomonas syringae pv. Syringae Van Hall 1902

Aptata (Brown & Jamieson)yong et al.1978

Aptata (Brown & Jamieson ) yong et al.1978. P. syringae pvبود که باعث مرگ گیاهچه ها و بوته های چند برگی و سوختگی  اکثر برگهای پائینی بوته های مسن تر شده بود. لکه ها اغلب به صورت پراکنده  در پهنک برگ و گاهی در حاشیه برگ ها قابل مشاهده بود و آبسوختگی و کلروز مشخصی در اطراف لکه های نکروزه وجو داشت . لکه ها اغلب یک تا چند سانتی متر قطر داشته و به رنگ قهوه ای مایل به سیاه بودند. با گسترش لکه ها به سمت رگبرگ میانی ، بخش وسیعی از پهنک تا تمامی آن سوخته و سوختگی به سمت دمبرگ پیشروی می کرد و نکروز دمبرگ به صورت نوارهای طولی قابل مشاهده بود. علائم بیماری در طول فصل رشد و به خصوص در شرایط هوای خنک و بارانی روی بوته های جوان شدید بود. علائم  این بیماری با علائم لکه برگی و بلایت گزارش شده از اصفهان

تا بژ برجسته ، به قطر ۳-۲ میلی متر در سطح ظاهر گردیدند. تک کلنی ها انتخاب و روی محیطNAG تکثیر گردید. جدایه ها روی محیط فوق در یخچال و یا به صورت سوسپانسیون کدر در آب مقطر استریل در دمای اتاق نگهداری شدند. تعدادی از جدایه ها برای نگهداری بلند مدت لیوفی لایز (Lyophilized) (Schaad et al.2001)گردیدند .

آزمون بیوشیمیائی و فیزیولوژیک

آزمون های بیوشیمیایی و فیزیولوژیک طبق روش های متعارف

(schaad et al.2001 ,Lelliott et al.1996,KING et al.1954,Fahy & Persley 1983)

انجام شد بررسی طیف منابع کربن قابل استفاده جدایه ها بر اساس روش های متداول (schaad et al.2001)  و با استفاده از محیط معدنی پایه آیر و همکاران (Ayer et al.1919) انجام گرفت . قندها و اسید های آمینه باروش تندال (Tyndall)استریل و غلظت نهائی ۱-۲/۰درصد به محیط پایه حاوی ۲/۱ درصد آ

درصد ، سلول پاره شدند.DNA   به روش های متداول با افزودن فنل و کلروفرم استخراج و با اتانول رسوب داده شد(Ausubel et al.1991).رسوب اسیدهای نوکلئیک در بافر TH × ۱/۰ حل وپس از تعیین غلظت به کمک اسپکتروفتو متر به بخش هائی تقسیم و در C ^°۲۰- نگهداری شد. از جدایه های استاندارد P.s.tomato,P.s. aptata(ICMP 459) ( جدا شده از گوجه فرنگی ) ،P.s.syringae (جدا شده از هلو و نیشکر مازندران )،P.s maculicola (ICMP 3935) و   P.viridiflava(جدا شده از پرتقال مبتلا به بلاست درمازندران ) نیز DNA استخراج و در انگشت نگاری به کار برده شد.

rep- PCR

rep- PCR (Repetitive exteragenic palindroamic) طبق روش های توصیه شده (( Weingart & Volksch 1997 ,Versal.ovic et al.1991.1994  و با استفاده از پرایمرهای BOXAIR ، ERICIR و ERIC2 انجاک شد. واکنش ها در حجم ۵۰ میکرولیتر و شامل (غلظت نهائی)۶۷ میل…………………..