فایلیا | دانلود فایل | دانلود تحقیق و مقاله

تعیین برخی ویژگی های فیزیکوشیمیایی و ردیابی سرولوژیکی جدایه ایرانی ویروس کوتولگی زبر ذرت

چکیده

ویروس کوتولگی زبر ذرت (maize rough dwarf virus – Iranian isolate , mrdv-i) یکی از ویروس های مهم در استان فارس محسوب می شود . رابطه این ویروس با ویروس های مشابه در داخل و خارج از ایران هنوز روشن نشده و ردیابی سرولوژیکی آن در سطح وسیع نیز هنوز امکان ELSA گیاهان زراعی گندم و برنج و علف های هرز دژگال ، پنجه مرغی ، ارزن وحشی ، جو موشی ، اویارسلام و ارزن دم روباهی به عنوان میزبانان طبیعی MRDV-I شناخته شدند . تمام گیاهان آلوده گونه های مزبور درجاتی از کوتولگی را در مقایسه با گیاهان ظاهراً سالم نشان می دادند . آلودگی به MRDV-I در جو و علف های هرز دائمی چمن ، قباق و مرغ پرتغال ، اسپانیا ، سوئیس ، سوئد و اسرائیل مشاهده گردید (conti 1983) . در ایران بیماری کوتولگی زبر ذرت برای اولین بار در سال ۱۳۶۰ به عنوان یکی بیماری ویروسی در مزارع مختلف ذرت فارس شناخته شد (Izadpanah et al.1983) . میزان آلودگی در مزارع مختلف ذرت طبق یک برآورده مقدماتی در سال ۱۳۶۰ بین صفر و ۳۵ درصد بود . در سال ۱۳۶۲ میزان توأم با راست ایستادن برگ ها و گال های پشت برگ ( شکل ۱ ) از مزارع باجگاه واقع در ۱۵ کیلومتری شمال شیراز جمع آوری و به آزمایشگاه منتقل شدند . سعی شد که بوته ها فاقد علائم ویروس ها و عوامل بیماریزای دیگر ذرت باشند . خالص سازی از بافت ریشه ذرت طبق روش وتر و همکاران (wetter et al.1969) با تغییراتی انجام گرفت . در هر نوبت خالص سازی ۲۰۰ گرم بافت ریشه پس از شستشوی کامل با آب ، در یک حجم بافر استخراج (۰٫۳ M NA₂HPO₄ , 0.01 M NA₂SO₃ , 0.001 M

اسپکتروفتومتری

طیف جذبی ویروس خالص سازی شده در ناحیه ماوراءبنفش با استفاده از اسپکتروفتومتر SPEKOL UV  بدست آمد . برای تعیین غلظت ویروس از ضریب جذب ۴ و میزان جذب آموده ویروس در ۲۶۰ نانومتر استفاده شد .

الکترون میکروسکوپی

از آموده های ویروس در مراحل مختلف خالص سازی نمونه هایی تهیه و در الکترون میکروسکوپ Leo 906E مورد بررسی قرار گرفت . به این منظور در الکتروفورز پروتئین در ژل پلی آکریل آمید چند باند مشاهده شد . لکن در آزمون Western blot تنها سه باند رنگ آمیزی گردید که وزن مولکولی آنها به ترتیب ۱۳۸، ۱۱۹  و ۱۱۳ کیلودالتون بود ( داده ها نشان داده نشده اند ) . این باند ها احتمالاً مربوط به کپسید داخلی هستند و پروتئین های مربوط به کپسید خارجی به علت ناپایداری پیکره ها در حین خالص سازی حذف شده اند . بوکارد و میلنی (Boccardo & Milin 1975) نیز ردیابی سه پروتئین مربوط به کپسید خارجی را مشکل یافته اند . اندازه پروتئین بزرگتر با اندازه علائم کوتولگی در منطق دشتک ( درودزن ) آلوده به MRDV-I بودند . برخی ازبوته های گندم علاوه بر کوتولگی دارای علائم زردی شبیه به علائم ناشی از ویروس های کوتولگی زرد جو بودند . سایر گیاهان آلوده عبارت بودند از برنج با علائم کوتولگی گال سیاه (Kamran et al.2000) ، دژگال

کوتولگی . از سوی دیگر پنجه مرغی (Digitaria sp)با رگه های قهوه ای و نوارهای زرد در حاشیه برگها و نمونه های جو (Hordeum vulgare) ، یولاف (Avena sativa) ، چمن (poa sp) ، مرغ (cynodon dactylon) و قیاق (sorghum halepense) جمع آوری شده از مزارع مبتلا آلوده به MRDV-I نبودند .

با توجه به ردیابی MRDV-I در زنجرک های ناقل در ابتدای فصل بهار و عدم ردیابی ……………………